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藥敏試驗檢測試劑盒(MIC測定)使用方法
1. 范圍
本方法規(guī)定了動物源細菌(大腸桿菌、沙門氏菌、腸球菌、金黃色葡萄球菌、副豬嗜血桿菌、魏氏梭菌和偽結(jié)核棒狀桿菌)藥敏檢測試劑盒的操作方法。
2. 材料
除微生物實驗室常規(guī)滅菌設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
2.1 恒溫培養(yǎng)箱35±2℃
2.2 生物安全柜
2.3 濁度計或者標準比濁管
2.3 微量加樣器1uL~1000uL
2.4 吸頭(與微量加樣器匹配)
3. 操作步驟
3.1 取出試劑盒,打開包裝待用。
3.2 菌液制備
將無菌棉簽用生理鹽水潤濕后,直接取過夜培養(yǎng)皿上數(shù)個新鮮菌落,與適量無菌生理鹽水混勻。然后,用標準比濁管或者濁度計校正菌液濃度至0.5麥氏單位(1~2×108CFU/mL)。最后,用試劑盒中的肉湯按照使用說明書要求的倍數(shù)稀釋,混勻備用。
3.3 菌液接種
除空白對照外,其余的95孔加入制備好(用前要混勻)的菌液100μL
空白對照孔中加入100μL無菌肉湯。蓋好板蓋并記錄菌號。
3.4 孵育
將檢測板置于35℃±2℃很穩(wěn)培養(yǎng)箱中孵育16~18小時。
3.5 觀察結(jié)果
在襯有黑底板的光線下,用肉眼觀察。
先觀察陰性對照孔和陽性對照孔:陰性對照孔應(yīng)無細菌生長,孔內(nèi)液體未見渾濁;陽性對照孔內(nèi)應(yīng)有細菌生長所形成的圓形或者網(wǎng)狀沉淀。
如果陰性和陽性對照結(jié)果正常,繼續(xù)觀察其余孔內(nèi)細菌生長情況,在無細菌生長的孔內(nèi)所含最低抗菌藥物濃度即為最低抑菌濃度(MIC)。
4. 結(jié)果記錄
將MIC結(jié)果記錄在耐藥性檢測結(jié)果統(tǒng)計表中。
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