樊福好：非洲豬瘟窗口期檢測指南

非洲豬瘟的窗口期長短不一，短者1～3天，長者2個月左右，平均為28天。抓住窗口期的有利時機是凈化和控制非洲豬瘟的唯一必要手段。

窗口期過后，豬只開始出現(xiàn)臨床癥狀，主要表現(xiàn)為精神沉郁、厭食、嘔吐、腹瀉、皮疹、關(guān)節(jié)痛、出血等。此時，無論是大群控制，還是個體監(jiān)控，都已經(jīng)失去了生產(chǎn)上的操作意義，非洲豬瘟窗口期處于關(guān)閉狀態(tài)。

確定豬只是否處于窗口期的方法很多，如病毒培養(yǎng)法、免疫組織熒光法、抗原檢測法等，但當(dāng)前最成熟的方法還是定性或定量的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法。

1.1 檢測樣本的選擇 根據(jù)研究數(shù)據(jù)，口腔拭子、鼻腔拭子都可以作為窗口期的檢測樣本，但是新鮮分泌的唾液往往具有更大的檢測優(yōu)勢，其病毒含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于口腔拭子和鼻腔拭子。新鮮分泌的唾液中非洲豬瘟病毒CT值比口鼻拭子中的非洲豬瘟病毒CT值平均低5左右。

1.2 唾液樣本處理 處于窗口期的豬只，尚具備較強的特異性免疫能力和非特異性免疫能力，機體對病毒的清除作用較強，兩者處于激烈對抗?fàn)顟B(tài)，尤其是唾液中的酶（溶菌酶、核酸酶、堿性磷酸酶等）活性較高，收集到唾液中的非洲豬瘟病毒如果含量過低，病毒很快將被唾液降解。因此，采集的唾液必須立即進(jìn)行核酸保護(hù)（即抑制唾液中的酶活性）。

1.3 唾液樣本檢測 由于處于窗口期內(nèi)唾液樣本中非洲豬瘟病毒含量較低，對檢測條件的要求較為苛刻。建議對檢測環(huán)境（溫度、空氣、水、操作臺面）、檢測試劑套裝、檢測儀器進(jìn)行比對和考核，慎重選擇。為了取得優(yōu)質(zhì)的唾液樣本，采樣之前需要對動物進(jìn)行禁食處理（12小時）。

研究證實，試管唾液中的病毒在靜置或離心狀態(tài)下，底部的非洲豬瘟病毒含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于試管上清中的病毒含量（CT值相差1～3），所以建議從試管底部取樣進(jìn)行檢測。

實施實驗室檢測工作之前，建議對操作人員進(jìn)行科學(xué)采樣和取樣培訓(xùn)，培訓(xùn)合格后才允許從事檢測工作。

影響窗口期檢測效果的因素很多，如操作人員、試劑、檢測設(shè)備，等等。

2.1操作人員 不同的操作人員，核酸檢測的結(jié)果差異很大。自從國家鼓勵養(yǎng)殖主體自主檢測以后，很多豬場購置了儀器和試劑盒。由于操作人員不熟練或錯誤操作，既浪費了資源，也貽誤了控制時機。操作人員上崗之前的操作熟練程度培訓(xùn)顯得尤為重要。

2.2 核酸純化 目前常用的核酸提取方法是加熱裂解法、膜提取法和磁珠提取法?？傮w來看，加熱提取法（俗稱的免提法）因為核酸純度不高、核酸提取量較低，不適合做唾液學(xué)檢測。國內(nèi)市場上的膜提取法的效果也存在較大差異，請進(jìn)行比較后謹(jǐn)慎選擇。

磁珠法的自動提取也是相當(dāng)不錯的選擇，磁珠法對實驗室操作人員有較高的技術(shù)要求，防止交叉污染現(xiàn)象的出現(xiàn)。

2.3 核酸擴增 核酸擴增試劑需要進(jìn)行試驗性比對選擇，爭取實現(xiàn)單拷貝擴增。請注意：那些適合臨床檢測的試劑盒大部分不適合窗口期檢測。

2.4熒光數(shù)據(jù)讀取 核酸檢測儀對熒光數(shù)據(jù)的讀取和分析也是重要的考察指標(biāo)，防止出現(xiàn)誤判現(xiàn)象的出現(xiàn)。

非洲豬瘟進(jìn)入中國以后，國家公布的檢測方法僅僅適用于臨床檢測，生產(chǎn)指導(dǎo)意義不大，其中規(guī)定的采樣方法在實際操作中促進(jìn)了病毒的擴散和疫情的傳播，建議進(jìn)行緊急修正。

我國養(yǎng)豬業(yè)中非洲豬瘟病毒的污染面較大，尤其是來自疫區(qū)的種苗應(yīng)該成為窗口期監(jiān)控的重點；處于疫區(qū)的種豬企業(yè)中的種公豬和母豬應(yīng)該成為窗口期監(jiān)控的重點，監(jiān)測頻率為按周隨機抽樣。

科學(xué)的非洲豬瘟窗口期檢測對于我國非洲豬瘟的控制具有重要的科學(xué)意義和生產(chǎn)實踐意義，建議有關(guān)部門和科研機構(gòu)高度重視窗口期檢測和監(jiān)測政策的制定實施和方法學(xué)研究，盡快實現(xiàn)我國非洲豬瘟的有效控制。